Collagenolytic enzymes produced by fungi: a systematic review

Abstract Specific proteases capable of degrading native triple helical or denatured collagen have been required for many years and have a large spectrum of applications. There are few complete reports that fully uncover production, characterization and purification of fungi collagenases. In this review, authors searched through four scientific on line data bases using the following keywords (collagenolytic OR collagenase) AND (fungi OR fungus OR fungal) AND (production OR synthesis OR synthesize) AND (characterization). Scientific criteria were adopted in this review to classify found articles by score (from 0 to 10). After exclusion criteria, 21 articles were selected. None obtained the maximum of 10 points defined by the methodology, which indicates a deficiency in studies dealing simultaneously with production, characterization and purification of collagenase by fungi. Among microorganisms studied the non-pathogenic fungi Penicillium aurantiogriseum and Rhizoctonia solani stood out in volumetric and specific collagenase activity. The only article found that made sequencing of a true collagenase showed 100% homology with several metalloproteinases fungi. A clear gap in literature about collagenase production by fungi was verified, which prevents further development in the area and increases the need for further studies, particularly full characterization of fungal collagenases with high specificity to collagen.

Screening, production and biochemical characterization of a new fibrinolytic enzyme produced by Streptomyces sp. (Streptomycetaceae) isolated from Amazonian lichens / Seleção, produção e caracterização bioquímica de uma nova enzima fibrinolítica produzida por Streptomyces sp. (Streptomycetaceae) isolada de liquens da Amazônia

Thrombosis is a pathophysiological disorder caused by accumulation of fibrin in the blood. Fibrinolytic proteases with potent thrombolytic activity have been produced by diverse microbial sources. Considering the microbial biodiversity of the Amazon region, this study aimed at the screening, production and biochemical characterization of a fibrinolytic enzyme produced by Streptomyces sp. isolated from Amazonian lichens. The strain Streptomyces DPUA1576 showed the highest fibrinolytic activity, which was 283 mm2. Three variables at two levels were used to assess their effects on the fibrinolytic production. The parameters studied were agitation (0.28 - 1.12 g), temperature (28 - 36 ºC) and pH (6.0 - 8.0); all of them had significant effects on the fibrinolytic production. The maximum fibrinolytic activity (304 mm2) was observed at 1.12 g, 28 ºC, and pH of 8.0. The crude extract of the fermentation broth was used to assess the biochemical properties of the enzyme. Protease and fibrinolytic activities were stable during 6 h, at a pH ranging from 6.8 to 8.4 and 5.8 to 9.2, respectively. Optimum temperature for protease activity ranged between 35 and 55 °C, while the highest fibrinolytic activity was observed at 45 ºC. Proteolytic activity was inhibited by Cu2+ and Co2+ ions, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and pepstatin A, which suggests that the enzyme is a serine protease. Enzymatic extract cleaved fibrinogen at the subunits Aalpha-chain, Abeta-chain, and gama-chain. The results indicated that Streptomyces sp. DPUA 1576 produces enzymes with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity, enzymes with an important application in the pharmaceutical industry.

A trombose é uma doença patofisiológica causada pelo acúmulo de fibrina no sangue. Proteases fibrinolíticas com potente atividade trombolítica são produzidas por diversas fontes microbianas. Considerando a biodiversidade microbiana da região amazônica, o presente estudo teve como objetivo a seleção, produção e caracterização bioquímica da enzima fibrinolítica de Streptomyces sp. isolado de líquens da Amazônia. Streptomyces DPUA1576 foi a melhor produtora com atividade fibrinolítica de 283 mm2. Três variáveis em dois níveis foram utilizadas para determinar as variáveis mais relevantes na produção da enzima fibrinolítica (FA). Os parâmetros estudados foram agitação (0.28 - 1.12 g), temperatura (28 - 36 ºC) e pH (6.0 - 8.0) e todos obtiveram efeitos significativos na produção fibrinolítica. A maior atividade fibrinolítica (304 mm2) foi obtida a 1.12 g, 28 ºC e pH 8.0. O extrato bruto da fermentação foi usado para determinar as propriedades bioquímicas da enzima. Atividades proteásica e fibrinolítica foram estáveis durante 6 horas no intervalo de pH entre 6.8 - 8.4 e 5.8 - 9.2, respectivamente. Temperatura ótima para a atividade proteásica foi entre 35 - 55 °C, enquanto que para a atividade fibrinolítica foi de 45 ºC. Atividade proteásica foi inibida por íons Cu2+ e Co2+, fluoreto de fenilmetilsulfonil e pepstatina A, na qual sugere que a enzima é uma serino-protease. O extrato enzimático degradou o fibrinogênio nas subunidades Aalfa, Abeta e gama . Os resultados apresentados indicam que Streptomyces sp. DPUA 1576 produz enzimas com atividade fibrinolítica e fibrinogenolítica, enzimas com aplicações importantes na indústria farmacêutica.

Assessment of toxicity of a biosurfactant from Candida sphaerica UCP 0995 cultivated with industrial residues in a bioreactor

Background: The aim of the present study was to propose a low-cost method for the production of a biosurfactant by the yeast Candida sphaerica and assess its toxicity and phytotoxicity. The medium was formulated with distilled water supplemented with residue from a soy oil refinery (5%) and corn steep liquor (2.5%) as substrates. These two products were the sources of carbon and nitrogen as well as mineral elements to encourage the growth of the microorganism and production of a biosurfactant. Results: The isolated biosurfactant yield was 6.364 g/l. The biosurfactant exhibited an excellent ability to reduce surface tension (26 mN/m) and demonstrated no toxicity against seeds of Brassica oleracea, Chicoria intybus and Solanum gilo or the micro crustacean Artemia salina employed as a bioindicator. The biosurfactant exhibited no antimicrobial activity against the fungi and bacteria tested. Conclusions: The promising results obtained in this study indicate the feasibility of producing biosurfactants from powerful non-toxic organic residues and their application in the bioremediation of contaminated soil and water.

Horizontal transmission and effect of the temperature in pathogenicity of Beauveria bassiana against Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae)

The aim of this work was to evaluate the effect of temperature on the pathogenicity of Beauveria bassiana against Diatraea saccharalis and evaluate the horizontal transmission capacity among the sugarcane borer larvae. The strains were most pathogenic at 26ºC, followed by 32ºC than at 20ºC, with respective mortalities of 100, 50 and 30.3%. The lethal time was also affected by the temperature, with the shortest LT 50 observed at 26ºC (2.2 days) and the longest at 20ºC (16.2 days). The URM2915 strain appeared most effective in all the experiments as having potential for deployment in biological control programs for the sugarcane borer. Results in horizontal transmission of B. bassiana showed that this procedure could also be adopted as control strategy for the sugarcane borer.

Partial characterization of an inulinase produced by Aspergillus japonicus URM5633

Enzymes obtained by fermentation processes offer a number of advantages and have been widely researched and used throughout the world. This study aimed to partially characterise an inulinase produced from palm and cassava peel. The enzyme was produced via the solid-state fermentation of Aspergillus japonicus URM5633. The optimal temperatures were 50ºC and 55ºC, and the optimal pH values were 5.2 and 3.4 for inulinase fermentatively produced from palm and cassava peel, respectively. The thermostability measurements for inulinase produced in palm showed that the relative activity remained below 100% until 30 minutes of stability for all temperatures, but reached 106.8% at a temperature of 50ºC after 60 minutes. Inulinase from the crude extract of cassava peel was pH stable and only decreased to 55% of the maximal activity over the course of the assay, suggesting that this enzyme can be used in inulinase production and can be utilized in food industries.

Antifungal activity of lectins against yeast of vaginal secretion

Lectins are carbohydrate-binding proteins of non-imune origin. This group of proteins is distributed widely in nature and they have been found in viruses, microorganisms, plants and animals. Lectins of plants have been isolated and characterized according to their chemical, physical-chemical, structural and biological properties. Among their biological activities, we can stress its fungicidal action. It has been previously described the effect of the lectins Dviol, DRL, ConBr and LSL obtained from the seeds of leguminous plants on the growth of yeasts isolated from vaginal secretions. In the present work the experiments were carried out in microtiter plates and the results interpreted by both methods: visual observations and a microplate reader at 530nm. The lectin concentrations varied from 0.5 to 256µg/mL, and the inoculum was established between 65-70% of trammitance. All yeast samples isolated from vaginal secretion were evaluated taxonomically, where were observed macroscopic and microscopic characteristics to each species. The LSL lectin did not demonstrate any antifungal activity to any isolate studied. The other lectins DRL, ConBr and DvioL, showed antifungal potential against yeast isolated from vaginal secretion. These findings offering offer a promising field of investigation to develop new therapeutic strategies against vaginal yeast infections, collaborating to improve women's health.

Prospecção de leveduras em secreção vaginal e correlação com hemograma e dosagem de glicose / Prospection of yeasts in vaginal secretion and correlation with hemograma and dosage of glucose

No período compreendido entre outubro de 2003 e agosto de 2004 foram realizadas coletas de secreção vaginal para exame micológico em 146 mulheres: 12 grávidas, 11 com sintomas e 1 sem sintomas; 134 não grávidas, 117 com sintomas e 17 sem sintomas de levedurose vaginal, atendidas no laboratório de ginecologia do Centro de Saúde Manuel Caldas de Araújo, Cidade do PAulista - PE. Em 60% das amostras de secreção vaginal foram detectadas leveduras ao exame direto e foi obtida cultura. Em 27% não foram observadas estruturas fúngicas ao exame direto e cultura não foi obtida. Em 13% foram observadas estruturas fúngicas ao exame direto e cultura não foi obtida. Foram isoladas leveduras pertencentes aos gêneros Candida (82%), Trichosporon (9%), Rhodotorula (8%) e Kloeckera (1%). Através da análise estatística o número de hemácias foi a única variável no hemograma que demonstrou correlação com a presença de leveduras na secreção vaginal.

Perfil de proteases de lesões cutâneas experimentais em camundongos tratadas com a lectina isolada das sementes de Canavalia brasiliensis / Proteases profile of skin wounds treated with lectin from Canavalia brasiliensis seeds

O objetivo deste estudo foi determinar o perfil de proteases em lesões cutâneas experimentais tratadas com a lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis (ConBr) livre e conjugada com o seu açúcar específico. Lesões cirúrgicas foram produzidas assepticamente na região dorsal de camundongos (n=120), divididos de acordo com o tratamento empregado: Grupo NaCl (NaCl 150mM), Grupo manose (manose 100mM), Grupo ConBr (ConBr 100µg mL-1) e Grupo ConBr/manose (solução contendo ConBr 100µg mL-1 preparada em manose 100mM). Amostras da área lesada foram coletadas para determinação do perfil de proteases e atividade colagenolítica no 2°, no 7° e no 12° dia de pós-operatório. O perfil das proteínas realizado através de eletroforese SDS-PAGE demonstrou a presença de proteínas com massa molecular de 67kDa em todos os grupos. O Grupo ConBr/manose apresentou a maior atividade colagenolítica no 12° dia de pós-operatório. A lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis influenciou a expressão de proteases com atividade colagenolítica podendo assim interferir no processo cicatricial das lesões cutâneas em camundongos.

The objective of the present study was determining the proteases profile of cutaneous healings treated with free and conjugated lectin of Canavalia brasiliensis (ConBr) and their specific sugar. An aseptic wound was produced in the thoracic area of the mice (n=120), divided according to the employed treatment: NaCl Group (150mM NaCl), manose Group (100mM manose), ConBr Group (100µg mL-1 ConBr) and ConBr/manose Group (solution containing 100µg mL-1 ConBr prepared in 100mM manose). Samples of the injured area were collected for determination of proteases profile and collagenolytic activity on 2nd, 7th e 12th days after the surgery. Electrophoresis SDS-PAGE demonstrated proteins with molecular mass of 67kDa in all groups. Group IV presented the highest collagenolytic activity on the 12th day post surgery. ConBr lectin influenced proteases expression with collagenolytic activity thus being able to intervene on skin wound healing in mice.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen / Proteins of goat seminal plasma related with precipitation index and semen quality

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P<0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372μg mL-1,respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494μg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil relatedwith precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P<0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494μgmL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

Jacaratia corumbensis O. Kuntze a new vegetable source for milk-clotting enzymes

The partial characterization and purification of milk clotting enzyme obtained from the (root latex) of Jacaratia corumbensis O. kuntze was studied, by fractional precipitation with ammonium sulphate and ion exchange chromatography. The ammonium sulphate precipitate showed five fractions (AS1- 0-20 percent; AS2 - 20-40 percent; AS3 - 40-60 percent; AS4 - 60-80 percent; AS5 - 80-100 percent) and among the fractions obtained, the 40-60 percent fraction (AS3) showed the highest milk clotting activity with a purification factor of 1.2 fold in relation to the crude extract. This fraction when applied on Mono Q column yielded two protein peaks (p1 and p2), but p1 pool showed the best milk-clotting activity. The optimal pH for the crude and partially purified extract was 6.5 and 7.0, respectively. The maximum milk-clotting activity was at 55ºC for the both crude and partially purified extracts. The enzyme was inhibited by iodoacetic acid which suggested that this enzyme was a cysteine protease, with molecular weight of 33 kDa.

A enzima coagulante de leite obtida de látex de raiz de Jacaratia corumbensis O. kuntze foi caracterizada parcialmente e purificada, por precipitação fracionária com sulfato de amônio e cromatografia de troca de íon. Foram utilizadas cinco frações de sulfato de amônio (AS1 - 0-20 por cento; AS2 - 20-40 por cento; AS3 - 40-60 por cento; AS4 - 60-80 por cento; AS5 - 80-100 por cento), a fração 40-60 por cento (AS3) mostrou alta atividade coagulante com um fator de purificação de 1,2 vezes em relação ao extrato bruto. Esta fração foi aplicada em coluna Mono Q obtendo dois picos de proteína (p1 e p2), o p1 mostrou melhor atividade coagulante. O pH ótimo para o extrato bruto e parcialmente purificado foi 6,5 e 7,0, respectivamente. A atividade coagulante foi atingida a 55ºC para ambos os extratos, bruto e parcialmente purificado. A enzima foi inibida por ácido iodoacético que sugere que esta enzima é uma cisteína protease, com peso molecular de 33 kDa.

Extraction of amylase from fermentation broth in poly (Ethylene Glycol) salt aqueous two-phase system

Studies were carried out on the partition of amylase from Bacillus subtilis in a minimal medium at 37 °C and 110 rpm. Enzyme recovery was carried out in aqueous two-phase system PEG-Phosphate salt were carried out. The best purification factor (5.4) was obtained in system PEG 1000 (16.7 percent w/w) with potassium phosphate (14.8 percent w/w), at pH 6.0, resulting in a recovery of 45.2 percent activity enzymatic in the salt-rich phase.

Enzimas amilolíticas têm sido amplamente investigadas com a finalidade de melhorar os processos industriais para a degradação do amido. Foi determinado que a extração da enzima em sistema bifásico aquosos é um método aplicável para separação e purificação de biomoléculas em misturas. Vários sistemas compostos de soluções aquosas de polietilenoglicol e fosfato foram avaliados. Estudos de produção em meio mínimo suplementado, à 37°C, com uma velocidade de agitação de 110rpm e recuperação da amilase a partir do Bacillus subtilis em sistema bifásico aquoso PEG-fosfato foram avaliados. O melhor fator de purificação (5.4) foi obtido no sistema PEG 1000 (16.7 por cento w/w) com fosfato de potássio (14.8 por cento w/w), a pH 6.0, resultando na recuperação da atividade enzimática de 45.2 por cento na fase rica em sal.

O polissacarídeo do Anacardium occidentale L. na fase inflamatória do processo cicatricial de lesões cutâneas / The polysaccharide from Anacardium occidentale L. in the inflammatory phase of the cutaneous wound healing

O efeito do polissacarídeo de Anacardium occidentale L. (POLICAJU) foi avaliado na fase inflamatória do processo cicatricial em camundongos (Mus musculus) Swiss (n=90), organizados de acordo com o tratamento empregado: Grupo I (NaCl 150mM), Grupo II (ácido ascórbico 75mg ml-1) e Grupo III (emulsão contendo POLICAJU 150mg ml-1 preparado em ácido ascórbico 75mg ml-1). As lesões cutâneas foram realizadas assepticamente na região torácica dorsal e cada ferida foi tratada em dose única (200µl) imediatamente após a cirurgia. As feridas foram avaliadas diariamente sob o ponto de vista clínico e histopatológico até o 6º dia de pós-operatório (PO). No 5º dia PO, observou-se um menor percentual de edema e hiperemia no Grupo III em relacão aos grupos controle, ao passo que os valores de área da ferida e do percentual de contracão não foram estatisticamente significativos. A avaliacão histopatológica do grupo tratado com POLICAJU demonstrou a presenca de tecido de granulacão fibrovascular no 6º dia PO, enquanto os grupos controle apresentavam tecido de granulacão com padrão vascular. O tratamento proposto propiciou sinais flogísticos menos acentuados (edema e hiperemia) durante o período inflamatório, compatível com o processo de reparacão mais avancado do ponto de vista histopatológico, sugerindo a possível utilizacão clínica da emulsão contendo POLICAJU.

Seleção de leveduras da Região Amazônica para produção de protease extracelular / Screening of yeasts from Amazon Region for extracellular protease production

O objetivo deste trabalho foi identificar 50 leveduras isoladas a partir de diferentes substratos da Região Amazônica e selecionar uma espécie de maior atividade proteolítica. Entre as 26 espécies identificadas predominaram Candida aquatica (12 por cento) e Candida tropicalis (10 por cento). A fermentação submersa foi realizada em Extrato de Malte suplementado com gelatina 1 por cento, Candida intermedia foi a que expressou maior atividade proteolítica, halo = 25 mm e 273 U/mL, crescimento máximo a 30 °C, viabilidade celular 6,2 x 10(6) UFC, em 48 horas, não demonstrou características de patogenicidade e a melhor densidade do inóculo foi 3 por cento, utilizando-se culturas com 24 horas de crescimento em ágar Malte.

The objective of this work was to identify 50 yeasts isolates obtained from differents substracts from Amazon Region and to select one species of higher proteolytic activity. Among the 26 identified species it had predominance of Candida aquatica (12 percent) and Candida tropicalis (10 percent). The submerged fermentation was carried out in Malt Extract supplemented with gelatin 1 percent, Candida intermedia exhibited higher proteolytic activity, halo = 25 mm and 273U/mL, the maximum growth 30 °C, the cellular viability 6.2 x 10(6) UFC, in 48 hours, did not demonstrate pathogenicity characteristics and the best inoculum density tested was 3 percent, using 24 hours Malt agar cultures.

Purification of plasmid (pVaxLacZ) by hydrophobic interaction chromatography

O DNA plasmidial tem sua aplicação na terapia gênica, tendo que apresentar elevado grau de pureza. Um método de purificação foi descrito neste trabalho, que inclui precipitação com sulfato de amônio seguida da cromatografia de interação hidrofóbica, usando a resina phenyl sepharose 6 fast flow. Ocorreu aumento da pureza das amostras analisadas, em torno de 30% após a precipitação com sulfato de amônio. Houve significativa redução dos contaminantes após a eluição das amostras na cromatografia de interação. O maior rendimento obtido foi 53% e fator de purificação 3,1 vezes após a eluição na cromatografia de interação hidrofóbica. A vantagem deste método é a possibilidade de explorar o caráter hidrofóbico, constituído de material genético de fita simples, tais como RNA e DNA genômico e proteínas, que podem interferir na liberação deste material para possíveis aplicações em terapia gênica.

Aspergillus niveus Blochwitz 4128URM: new source for inulinase production

Aspergillus niveus 4128URM isolado de rizosfera de girassol demonstrou ser uma nova fonte de inulinase. A enzima foi produzida em meio de cultura contendo inulina como substrato nas concentrações de 10, 15 e 20 g L-1. Atividade máxima da enzima foi obtida em meio contendo 20 g L-1 de inulina. A enzima foi parcialmente purificada utilizando precipitação com sulfato de amônio, seguida por cromatografia de troca iônica (DE-52) e exclusão molecular (Sephadex). Os resultados mostraram o pH e temperatura ótima da inulinase do extrato bruto foi 4,0 e 4,8 e 45ºC, respectivamente. A enzima foi purificada 34,65 vezes com rendimento de 53,63%. A. niveus 4128URM pode ser utilizado na produção de inulinase com perspectivas de uso na indústria de alimentos.

Partition of proteins in aqueous two-phase systems based on Cashew-nut tree gum and poly(ethylene glycol)

A partição de duas proteínas, albumina de soro bovino (BSA) e tripsina foi estudada no sistema bifásico aquoso Polietileno glicol(PEG) - Goma do cajueiro. O diagrama de fases foi estabelecido para a Goma do Cajueiro e para PEG de peso molecular 1500 em duas diferentes temperaturas. A influência de vários parâmetros na partição destas proteínas, incluindo concentração dos polímeros, pH, adição de sal e temperatura foi investigada. Os resultados desta pesquisa demonstraram a importância das características da proteína na partição em sistemas bifásicos aquosos.

Recovery of ascorbic oxidoreductase from crude extract with an aqueous two-phase system in a perforated rotating disc contactor

Uma coluna de discos perfurados rotativos foi utilizada na extração da enzima ascorbato oxidorredutase (E.C.1.10.3.3), obtida do extrato bruto de Curcubita maxima, através da utilização do sistema bifásico aquoso Polietilenoglicol-sais de fosfato. Os efeitos da velocidade da fase dispersa nos coeficientes de transferência de massa e na eficiência de separação para valores de 1, 2 e 3 mL/min foram estudados. Observou-se um aumento da transferência de massa com a velocidade da fase dispersa, enquanto que a eficiência de separação demonstrou uma ligeira redução com o aumento deste parâmetro. Os resultados experimentais obtidos durante a extração contínua demonstraram que a atividade da ascorbato oxidorredutase se concentrou preferencialmente na fase rica em sal para todas as condições estudadas. A maior recuperação da atividade enzimática foi de 236%, com um fator de purificação de 34 para o valor de 1 mL/min para a fase dispersa.

Large scale purification of Clostridium perfringens toxins: a review

Clostridium perfringens, a Gram-positive anaerobic bacterium, is widespread in the environment and commonly found in the intestines of animals, including humans. C. perfringens strains are classified into five toxinotypes (A, B, C, D and E) based on the production of four major toxins (alpha, ß, épsilon, iota). However the toxins (theta, delta, lambda and enterotoxin) are also synthesized by C. perfringens strain. Many attempts to purify the toxins produced by C. perfringens have been proposed. In this review we discuss the purification methods used to isolate toxins from C. perfringens reported in last four decades

Pathogenicity characteristics of stocked and fresh yeasts strains

Com o objetivo de avaliar a patogenicidade de leveduras de interesse médico, foram selecionadas 15 amostras preservadas em óleo mineral na Micoteca URM, Centro de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco e 15 isolados recentes, provenientes de amostras clínicas de pacientes com AIDS, internados no Hospital das Clínicas, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Pernambuco. Com relacão as características de patogenicidade, foram avaliados a capacidade desses microorganismos crescerem a 37ºC, bem como apresentarem atividade de fosfolipase e protease. As 30 amostras cresceram a 37ºC e apresentaram atividade quantitativa de protease, entretanto não apresentaram essa atividade quando testadas em meio sólido. Das 15 amostras preservadas, 13 (86,66 per center) apresentaram atividade fosfolipase positiva e duas (13,34 per center) atividade fosfolipásica negativa e das 15 amostras isoladas de pacientes com AIDS, quatro (26,66 per center) apresentaram atividade de fosfolipase positiva e 11 (73,34 per center) apresentaram atividade fosfolipásica negativa.

Screening of Mucor spp. for the production of amylase, lipase, polygalacturonase and protease

Fungi are well known by their ability to excrete enzymes into the environment. Among them, representatives of Mucor Fresen. Have important biotechonological potential and some of them produce industrial enzymes. This work studied amylase, lipase, polygalacturonase and protease production by fifty-six isolates of Mucor belonging to 11 different taxa, selected from herbivores dung using solid media. The results showed that the majority of the isolates presented several enzymatic activities with predominance of polygalacturonase (96 percent), followed by amylase (84 percent), protease (82 percent) and lipase (66 percent).